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Swescript RT II Primeiro Kit de Síntese de CDNA Strand

Status de disponibilidade:
  • G3332-50.

Descrição do Produto

Introdução ao Produto:

Este produto utiliza a transcriptase reversa mutante modificada para sintetizar a primeira vertente do ADNc com RNA total ou mRNA como modelo para transcrição reversa eficiente. O kit contém todos os reagentes necessários para sintetizar a primeira vertente de ADNc com alta qualidade, e fornece dois tipos de primers de síntese de cDNA para escolha: o primer hexamer aleatório e oligo (DT) 18 primer sintetizou produtos de ADNc simples que podem ser diretamente usado para reações subseqüentes de PCR ou QPCR. O Swescript RT II (transcriptase reversa) é uma transcriptase reversa mutante baseada na transcriptase reversa MLV e obtida através da triagem evolutiva in vitro. O Swescript RT II não tem atividade de Rnase H. A degradação do RNA no modelo de hibridação de DNA / RNA durante a primeira reação de síntese de cDNA de fita foi evitada, de modo a garantir a quantidade e o comprimento da primeira síntese de cDNA. Em comparação com a enzima do tipo selvagem e a primeira geração de Swescript RT I, a segunda geração de Swescript RT II melhorou ainda mais a eficiência de estabilidade térmica e a síntese de ADNc. Pode sintetizar eficientemente o ADNc no intervalo de 42-65 ℃ e completar a reação de transcrição reversa, logo que 5 min, especialmente adequado para a transcrição reversa do RNA com estrutura complexa.

Conteúdo do pacote:

Gato. Não.

Descrição do Produto

Volume

G3332.

Swescript RT II Primeiro Kit de Síntese de CDNA Strand

50RXNS / 100RXNS.

Componentes:

Número do componente.

Componente

G3332-50.

G3332-100.

G3332-1.

Mistura de enzima Swescript RT IIa

50ul

100ul.

G3332-2.

Buffer de reação 5 ×b

200ul.

400Ul.

G3332-3.

Primer Oligo (DT) 18 (100um)

50ul

100ul.

G3332-4.

Primer hexamer aleatório (100um)

50ul

100ul.

G3332-5.

Água livre de nuclease

1ml.

1ml.

Manual

1 pc.

1 pc.

a: Com inibidor de rnase

b: Com mistura DNTP e mg² +

Condição de armazenamento:

Transporte de saco de gelo molhado; Armazenado a -20 ℃ temperatura, válido por 12 meses.

Uso:

O primeiro passo para a síntese de cDNc

1. Preparação do sistema de reação de transcrição reversa (sistema de reação 20ul recomendado)

Componente

Volume

Tampão de reação 5x.

4ul.

Primer Oligo (DT) 18 (100um)

1um.

ou primer hexamer aleatório (100um)

ou 1um.

ou primer específico genético (2um)

ou 1um.

Swescript RT I Enzyme Mix

1um.

RNA total / mRNA *

0.1 ng-5ug / 10 pg-0.5ug

Água livre de nuclease

Adicionar a 20ul.

Nota: Para altos modelos GC ou complexos, o modelo de RNA, iniciadores de transcrição reversa e água sem nucase podem ser misturados com antecedência e, em seguida, resfriado no gelo rapidamente após ser mantido a 65 ℃ por 5 min. E então você adiciona os outros componentes de reação.

2. Misture suavemente e centrifugue;

3. Configuração do programa de transcrição reversa:

Temperatura

Time

25 ℃a

5 min

50 ℃.b

15-30 min

85 ℃

5 S.

R: Por exemplo, o primer hexamer aleatório é selecionado e incubado a 25 ℃ por 5 min, então a reação subseqüente é realizada. Se você optar por usar Oligo (DT) 18 primer ou gene primer específico, você pode conduzir diretamente uma reação a 55 ℃;

B: Para modelos altos GC ou complexos, a temperatura de transcrição reversa pode ser aumentada para 65 ℃.

Notas:

1. Por favor, use luvas descartáveis ​​durante a operação para evitar a contaminação do RNase.

2. Os produtos de transcrição reversa podem ser armazenados em -20 ℃ por um curto período de tempo. Se for necessário armazenamento de longo prazo, recomenda-se armazená-los a -80 ℃ após a embalagem para evitar ciclos repetidos do congelamento.

3. Se o modelo é de origem eucariótica, recomenda-se selecionar o Primer Oligo (DT) 18 e emparelhe-o com o 3 'poli uma cauda de mRNA eucariótica para obter o maior rendimento do cDNA de comprimento total.

4. Para a transcrição reversa de RNA procariótica, o iniciador hexamer aleatório ou o genético é utilizado.

5. O primer hexamer aleatório possui ampla aplicabilidade e é adequado para mRNA, RRNA, TRNA, pequenos modelos de RNA e LNCRNA.

6. Se a transcrição reversa for seguida pelo ensaio QPCR, o Primer Oligo (DT) 18 primer e o primer hexamer aleatório podem ser misturados para tornar a eficiência da síntese de ADNc em todas as regiões do mRNA, o que ajuda a melhorar a autenticidade e a repetibilidade dos resultados quantitativos.

G3332-50A.

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